Gieo hạt lúc quả lan còn chưa bung
1. M ôi trường có 2 phần
A. Nửa củ khoai tây, nửa trái chuối già, miếng đu đủ chín bằng nửa trái chuối, 500ml nước dừa rám (dừa có cơm dầy). Khoai tây, chuôi, đu đủ bằm nhỏ cho lên bếp nấu sôi trong 30 phút với nước dừa, nấu xong lọc ra lấy nước còn lại khoảng 300ml.
A. Nửa củ khoai tây, nửa trái chuối già, miếng đu đủ chín bằng nửa trái chuối, 500ml nước dừa rám (dừa có cơm dầy). Khoai tây, chuôi, đu đủ bằm nhỏ cho lên bếp nấu sôi trong 30 phút với nước dừa, nấu xong lọc ra lấy nước còn lại khoảng 300ml.
B. Khoáng vô cơ: (NH4)2HP04 = > 1,2g
MgSO4 = > 0,25g
KH2PO4 = > 0,25g
Glucose = > 20g
Ag = > 20g
Than hoạt t ính = > 1g
Công cụ: Erlen, đèn cồn, cán dao, nhíp, becher
Tất cả pha 1 lít môi trường.
Chia vào erlen 250ml, dày khoảng 1cm. Hấp 125 độ C, 30 phút.
Để nguội qua vài ngày để kiểm tra nhiễm.
Chia vào erlen 250ml, dày khoảng 1cm. Hấp 125 độ C, 30 phút.
Để nguội qua vài ngày để kiểm tra nhiễm.
Chú ý:
Chỉnh pH về 5.5 bằng NaOH hoặc acid citric.
Khuấy đều agar đun nhẹ trước khi rót ra erlen.( Chủ yếu acid citric hạt bỏ vào, nếu lỡ dưới 5.5 thì nâng lên lại bằng NaOH 1N. Đo pH bằng máy đo).
Chỉnh pH về 5.5 bằng NaOH hoặc acid citric.
Khuấy đều agar đun nhẹ trước khi rót ra erlen.( Chủ yếu acid citric hạt bỏ vào, nếu lỡ dưới 5.5 thì nâng lên lại bằng NaOH 1N. Đo pH bằng máy đo).
Chọn quả:
Hai yếu tố lớn là tuổi của quả và giống giả hạc.
Hai yếu tố lớn là tuổi của quả và giống giả hạc.
Theo tài liệu thì nói quả lan hơn 200 ngày tuổi là có thể dùng, em thấy phải lâu hơn, ước tính từ mùa hoa đến khi gieo phải hơn 300 ngày.
Sau tết âm lịch thì một số quả đổi màu, xốp, nhẹ, trong chùm có quả bung ra thì hái hết quả trên thân đó xuống.
Quả nào nứt rồi thì bỏ, lựa kỹ chỉ lấy những quả chưa nứt.
Quả nào nứt rồi thì bỏ, lựa kỹ chỉ lấy những quả chưa nứt.
Chưa gieo liền thì gói lại, bỏ vào tủ lạnh ngăn mát đươc khoảng 1 tuần.
Chuẩn bị becher nhỏ đựng cồn 70, đèn cồn, giấy bạc, nhíp, cán dao và lưỡi dao số 10.
Chuẩn bị becher nhỏ đựng cồn 70, đèn cồn, giấy bạc, nhíp, cán dao và lưỡi dao số 10.
Gieo h ạt: tỷ lệ nhiễm 30%.
Cho cồn 70 độ vào 1/2 becher nhúng dao, gắp vào đưa vào tủ cấy ( nhớ vệ sinh tủ cấy thật kỹ, cách đơn giản nhất là lau cồn 70 khắp các bề mặt).
Đưa đèn cồn, môi trường đã chuẩn bị, giấy bạc và quả vào luôn.
Cho cồn 70 độ vào 1/2 becher nhúng dao, gắp vào đưa vào tủ cấy ( nhớ vệ sinh tủ cấy thật kỹ, cách đơn giản nhất là lau cồn 70 khắp các bề mặt).
Đưa đèn cồn, môi trường đã chuẩn bị, giấy bạc và quả vào luôn.
Đốt đèn cồn (bắt đầu thao tác càng gần đèn cang tốt).
Gấp tờ giấy bạc có kích thước khoảng 1x1 tấc (~4 lớp). Đưa lên hơ trên ngọn lửa đèn cồn ky, bước này là vô trùng tờ giấy bạc.
Tiếp theo là vô trùng dao và gắp tương tự như tờ giấy bạc.
Gấp tờ giấy bạc có kích thước khoảng 1x1 tấc (~4 lớp). Đưa lên hơ trên ngọn lửa đèn cồn ky, bước này là vô trùng tờ giấy bạc.
Tiếp theo là vô trùng dao và gắp tương tự như tờ giấy bạc.
Lấy quả lan, dùng gắp nhúng vào cồn đốt sơ qua trên ngọn lửa.
Để xuống tờ giấy bạc, cắt bỏ cùi và nụ, cắt sơ đừng cắt xác quá, chỉ loại bớt phần khó tiệt trùng. Tiếp tục nhúng cồn và đốt kỹ thêm khoảng 3 lần nữa, tiếp tục hơ tờ giấy bạc lần cuối. Đốt qquủa lan lần nữa rồi cho lên tờ giấy bạc. Xong bước khử trùng.
Dùng dao cắt ở khoảng 1/4 quả tính từ cuống.
Mở từng erlen môi trường, dùng gắp gắp quả rắc hạt vào từng bình
Mở từng erlen môi trường, dùng gắp gắp quả rắc hạt vào từng bình
2,5 tháng tính từ lúc gieo
